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PCR核酸检测实验室建设标准
来源: 发布时间:2020-07-0329

能将微量的DNA大幅增加,是分子生物学研究和实验的常规方法,PCR实验室广泛应用于生物学各个领域,例如:艾滋病检测,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的检测和诊断,DNA指纹,个体识别,亲子鉴定及法医物证等等

标准的PCR 实验室分为四个区域,分别为:

n1.试剂配制区;

n2.样品处理区;

n3.核酸扩增区;

n4.产物分析区;

如使用全自动分析仪,区域可适当合并。三四区可合并为扩增产物分析。

一.PCR实验室布局

PCR实验室原则上为试剂准备区,样品制备区,扩增区和扩增产物分析区四个单独的工作区域,并设有专用走廊,各工作区域应设缓冲间,工作区与缓冲间宜安装连锁装置。不同功能的工作区应是分隔独立的,各工作区有明显的标志,不能直通,如果紧密连接,需安装物品传递窗。前两区为扩增前区,后两区为扩增后区,即从:试剂准备区——样品制备区——PCR扩增室——产物分析室,不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。各工作区顶部应该安装紫外灯,紫外灯波长为254mm,每20㎡一支40W的紫外灯。

PCR实验室设计规划平面布局

【各区的功能分别为】

试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。

样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。

扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。

扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间有一定的间隔。

二、PCR实验室主要设备

试剂准备区

仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等,加样器、天平除了要专用外,还应有定期校准。 试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。

标本制备区

仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器

扩增区

扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩增仪需进行校准。并配备UPS电源,以防止由于电压的波动,停电对扩增效果的影响。

分析区

本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的。

三. PCR实验室通风系统及压力控制

各区域之间应具备单间的实验工艺流,物流,人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验室之间的相互干扰,防止气溶胶扩散对实验过程造成污染。

PCR实验室并没有严格的净化要求,但是为避免各个实验区域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的气流组织形式,严格控制送,排风的比例以保证个实验区的压力要求。

四、污染的预防与控制

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中,常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因組DA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染,实验就必须停止,直到找到污染源为止,而且实验结果必须作废,需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐,浪費人力物力。因此要避免污染,首先应是预防,而不是排除。

4.1工作区域的严格划分

(1)各个实验区域设置合理

(2)各个实验区域要有明显的标记(如醒目的门牌或不同的地面鳜色等),以避免各个不同实验区域设备物品、试剂等发生混淆。

4.2合理的系统设置

(1)合理的空调通风系统设置,尽量釆用全送全排的空调系统;

2)严格的气流压力控制,保证不同的实验区内不同的压力要求。

4.3规范的操作

(1)临床基因扩增检验实验室的技术人员必须进行上岗培训,经培训冾格后才能从事临床基因扩增检验的工作

2)在实验操作过程中,操作者必须戴手套,并经常更换。此外,操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施;

(3)清洁工作及时、正确。实验工作结朿后,必须立即对本区进行清洁。除常规的消毒液体对表面进行摽拭消毒或紫外线灯的照射消毒外,对一些实验设备还应进行高压消毒处理。

4.4严格的管理

(1)严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室,有条件的情况下要设置独立的通道和进出整个实验区的门

(2)在各个实验区域使用带有明显区别标志的工作服(如不同颜色),当工作人员离开时不得将本区的工作服带至其它区域;

(3)尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。

4)扩增产物分析区是最主要的扩增产物污染来源,废液不能在实验室中倾倒,必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉,用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理,如焚烧等

5)扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质,应特别注意实验人员的安全防护。

4.5完备的实验室配套设施

完备的实验室配套设施是保证实验工作的必要条件,应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器,如超净工作台、离心机、加样器等。

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